溶酶体离子通道检测

TRPML1

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背景:TRPML1(Mucolipin-1)是由MCOLN1基因编码的非选择性阳离子通道,属于TRP超家族,专一性定位于晚期内体和溶酶体膜。它是溶酶体钙库释放的核心通道,受腔内信号磷脂PI(3,5)P₂特异性激活,通过产生局部Ca²⁺信号,精密调控溶酶体运输、自噬体-溶酶体融合、溶酶体胞吐及膜损伤修复等关键过程。

                                                                           TRPML1溶酶体膜片钳检测细胞内外液

TRPML1溶酶体膜片钳检测外液(mM):4 NaCl,140K-gluconate,10 HEPES,10 D-Glucose,1 EGTA,0.39 CaCl2•2H2O,2 MgCl2•2H2O,KOH调节pH=7.4。

TRPML1溶酶体膜片钳检测内液(mM):137NaCl,4KCl,10 HEPES,10 MES,10 D-Glucose,2 CaCl2•2H2O,2 MgCl2•2H2O,NaOH调节pH=4.6。

                                                                                          TRPML1药理学表征

1.利用溶酶体片钳检测ML-SA5对TRPML1溶酶体通道的激动作用。

Fig1.ML-SA5TRPML1溶酶体通道的激动EC50是155.7nM

注意:ML-SA5TRPML1溶酶体的激动作用一定是能被洗脱的,如果不能被洗脱其实就是漏电导致的电流增大根本不是TRPML1电流。


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